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驢源性成分(Don)核酸試劑盒規(guī)格

產(chǎn)品簡介

驢源性成分(Don)核酸試劑盒規(guī)格
上海聯(lián)祖生物相關產(chǎn)品:
酸氟桂利(標準品)2,3,6-三氟

鹽酸氟桂利2-氨基-6--硝基吡啶

異喹啉物(標準品)2-氨基并噻唑

羥酯(對羥基甲酸酯)(標準品)甲基-5-(beta-羥基

更新時間:2021-03-13
訪問次數(shù):733
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。

 產(chǎn)品名稱

 驢源性成分(Don)核酸試劑盒規(guī)格

 規(guī)格

 48T

 貨號

 LZP8152

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
鹽酸萘替芬(標準品)基甲酸甲酯

碳酸鈣(標準品)氨基-6-溴吡啶

甲磺酸氨地平(標準品)氨基-溴吡啶

伏格列波糖(標準品)5-溴-氨基吡啶

琥珀酸甲潑尼龍(標準品)一頻吶酮

六甲蜜(標準品)N-芴甲氧羰基-N'-*基-D-組氨酸

甲氧普(標準品)Boc-氨甲基哌啶

阿魏酸哌(標準品)吩噁

哌(標準品)三水合三化

奧扎格雷鈉(標準品)(1R,2S)-1-氨基-2-茚

TG100-115肌氨酸叔丁酯鹽酸鹽

鹽酸地芬尼多(標準品)2,二硫酚

鹽酸烏拉地爾6-甲氧基-1-茚酮

鹽酸烏拉地爾(標準品)鹽酸非那吡啶

鹽酸氟桂利(標準品)2,3,6-三氟

鹽酸氟桂利2-氨基-6--硝基吡啶

異喹啉物(標準品)2-氨基并噻唑

羥酯(對羥基甲酸酯)(標準品)甲基-5-(beta-羥基)噻唑

載脂蛋白A1Phospho-EGFR(Tyr1086) /FITC  熒光素標記兔抗、大、表皮生長因子受體IgG300 ul

自噬相關蛋白16APhospho-EGFR(Tyr1148) /FITC  熒光素標記兔抗、大、表皮生長因子受體IgG100 ul

酸化自噬相關蛋白4DPhospho-EGFR(Tyr1173) /FITC  熒光素標記兔抗、大、表皮生長因子受體IgG100 ul

酸化自噬相關蛋白4CPhospho-EGFR(Tyr845) /FITC  熒光素標記兔抗、大、表皮生長因子受體IgG100 ul

酸化自噬相關蛋白7Phospho-EGFR(Tyr998) /FITC  熒光素標記兔抗、大、表皮生長因子受體IgG20 ul

酸化自噬相關蛋白16AEGF(mouse)/FITC  熒光素標記表皮生長因子()IgG100 ul

酸化自噬相關蛋白9AHB-EGF/DTSF/FITC  熒光素標記肝素結合性表皮生長因子IgG100 ul

酸化自噬相關蛋白4DEGF/FITC  熒光素標記表皮生長因子()IgG20 ul

酸化自噬相關蛋白4DEP3/FITC  熒光素標記E受體3IgG100 ul
驢源性成分(Don)核酸試劑盒規(guī)格AGXT2L2蛋白抗體Tombozine中文名:別名:Tombozine分子式:C19H22N2O

β淀粉樣蛋白胞內(nèi)結構域相關蛋白1抗體Rauvoyunine B中文名:別名:分子式:C23H26N2O6

錨蛋白重復及SAM結構域蛋白6抗體Rauvoyunine A中文名:別名:分子式:C21H28N2O3

二磷酸腺苷核糖基轉移酶3抗體N-Feruloyltyramine中文名:N-阿魏酰酪胺別名:Moupinamide; 阿魏酰酪胺分子式:C18H194

二磷酸腺苷核糖基轉移酶5抗體11-Methoxyuncarine C中文名:別名:Reserpinine oxindole分子式:C18H194

 

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