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3TCQ-J2細(xì)胞公司相關(guān)產(chǎn)品:巨大戟-3-O-當(dāng)歸酸酯袋裝吸頭 '1000ul藍(lán)色吸頭,斜嘴,未滅菌,袋裝 1000/包,8包/箱 載玻片IL蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒巨大戟-5,20-縮酮盒裝無菌吸頭 '1000ul盒裝滅菌藍(lán)色吸頭,100支/盒,10盒/大盒,5大盒/箱 載玻片INSULIN R-ALPHA 蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱:小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
英文簡稱:3TCQ-J2細(xì)胞
貨號:LZ-X969966
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實(shí)驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實(shí)驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
膽色素染色液(改良Fouchet法)Clarithromycin;克拉霉素還原型谷胱甘肽(GSH)濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒
Masson-Fontana黑色素染色液Clarithromycin;克拉霉素還原型谷胱甘肽(GSH)濃度熒光定量檢測試劑盒
Masson-Fontana黑色素染色液Clarithromycin;克拉霉素環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE)總活性比色法定量檢測試劑盒
黑色素染色液(硫酸亞鐵法)Clindamycin (hydrochloride);鹽酸克林霉素環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性比色法定量檢測試劑盒
黑色素染色液(硫酸亞鐵法)Clindamycin (hydrochloride);鹽酸克林霉素環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1)活性熒光定量檢測試劑盒
黑色素脂褐素染色液(尼羅藍(lán)法)Clobetasol propionate;酸氯倍他索 環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1/2)總活性熒光定量檢測試劑盒
脂褐素染色液(Long Ziehl-Neelsen法)Clobetasol propionate;酸氯倍他索 環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-2)活性比色法定量檢測試劑盒
伊文思藍(lán)染色液(0.5%)Clobetasol propionate;酸氯倍他索 環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-2)活性熒光定量檢測試劑盒
TTC染色液(1%)Clonidine (hydrochloride);鹽酸可樂定氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒
TTC染色液(2%)Clonidine (hydrochloride);鹽酸可樂定氧化酶活性熒光定量檢測試劑盒
TTC染色液(2%)Clotrimazole;克霉唑活化凝血因子10(FACTOR Xa)活性比色法定量檢測試劑盒
Luxol Fast Blue染色液Clotrimazole;克霉唑活化凝血因子10(FACTOR Xa)活性熒光定量檢測試劑盒
Luxol Fast Blue髓鞘染色液Cloxacillin (sodium monohydrate);氯唑西林鈉活力藍(lán)色熒光檢測試劑盒
Weil髓鞘染色液Cloxacillin (sodium monohydrate);氯唑西林鈉活力臺盼藍(lán)染色試劑盒
改良Bielschowsky神經(jīng)染色液Colistin (sulfate);多粘菌素E硫酸鹽肌酸激酶(CK)活性酶動力比色法定量檢測試劑盒
3TCQ-J2細(xì)胞髓鞘堿性蛋白(MBP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SETD1B ELISA Kit血紅素抗體
STAT蛋白抑制因子1(PIAS1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SERPINB8 ELISA Kit戊型肝炎病抗體
去唾液酸糖蛋白受體2(ASGR2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SERPINB9 ELISA Kit神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1抗體
嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員12(EAR12)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human SERPIND1(Serpin family D member 1) ELISA Kit神經(jīng)膠質(zhì)生長因子/神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白β抗體
癌胚抗原(CEA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human BIRC2(Baculoviral IAP repeat-containing protein 2) ELISA Kit組氨酸三聚體核苷結(jié)合蛋白1抗體
核因子κB (NFκB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SERPINI2 ELISA Kit組蛋白去乙?;?抗體
Bcl2樣蛋白11(Bcl2L11)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SERINC1 ELISA Kit高度發(fā)散同源異型盒蛋白抗體
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會嚴(yán)重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。