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HAEC細(xì)胞公司相關(guān)產(chǎn)品:京尼平苷酸DMEM/F-12 高糖培養(yǎng)基 載玻片CYP1A2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒京尼平龍膽雙糖苷EMEM/F12 1:1,with L-Glutamine, without HEPWS,Phenol Red DMEM/F12 不含酚紅 載玻片CYP2B1蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒
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產(chǎn)品名稱:主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
英文簡稱:HAEC細(xì)胞
貨號(hào):LZ-X969959
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
多聚甲-戊二混合固定液(4%/1%)Capsaicin;天然辣椒堿單氧化酶B型(MAO-B)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
蔗糖-多聚甲溶液(5%)Capsaicin;天然辣椒堿單氧化酶B型(MAO-B)活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
蔗糖-多聚甲溶液(10%)Capsaicin;天然辣椒堿單氧化酶B型(MAO-B)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
蔗糖-多聚甲溶液(20%)Captopril;卡托普利蛋白磷酸酶1(PP1)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
蔗糖-多聚甲溶液(30%)Captopril;卡托普利蛋白磷酸酶2A( PP2A)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
戊二固定液(2%)Captopril;卡托普利蛋白磷酸酶2A( PP2A)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒
戊二固定液(2.5%)Carbamazepine;卡馬西平蛋白酶(PROTEASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
戊二固定液(2.5%)Carbamazepine;卡馬西平蛋白巰基/結(jié)合巰基含量比色法定量檢測(cè)試劑盒
戊二固定液(2.5%)Carbamazepine;卡馬西平蛋白巰基/結(jié)合巰基含量熒光定量檢測(cè)試劑盒
戊二固定液(4%)Carbenicillin (disodium);羧芐青霉素低密度脂蛋白膽固(LDL-Cholesterol)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒
戊二固定液(4%)Carbenicillin (disodium);羧芐青霉素電融合基質(zhì)
戊二固定液(電鏡,2.5%)Carbenicillin (disodium);羧芐青霉素凋亡誘導(dǎo)(DNA合成抑制)試劑盒
戊二固定液(電鏡,4%)L-Carnitine;左旋肉堿凋亡誘導(dǎo)(DNA酶抑制)試劑盒
乙-福爾馬林-醋酸固定液L-Carnitine;左旋肉堿凋亡誘導(dǎo)(DNA損傷)試劑盒
乙福爾馬林固定液L-Carnitine;左旋肉堿調(diào)亡DNA條帶檢測(cè)試劑盒
HAEC細(xì)胞前蛋白轉(zhuǎn)化酶9(PCSK9)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SFXN1 ELISA KitHECT E3泛素鏈接酶抗體
白血病抑制因子(LIF)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SFT2D3 ELISA Kit組蛋白去乙?;?1抗體
抗存活素抗體(Anti-Surv)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SFXN2 ELISA Kit磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體
Rho關(guān)聯(lián)卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock-2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SH3BP5 ELISA KitHHO1蛋白抗體
伴侶蛋白10(CPN10)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SH3BP4 ELISA Kit磷酸化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體
通用轉(zhuǎn)錄因子II F肽1(GTF2F1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SH2B1 ELISA Kit磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體
SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SH3D19 ELISA Kit磷酸化組蛋白H1.4抗體
注意事項(xiàng):
盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
染色后宜盡快檢測(cè),時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時(shí),盡量縮短觀察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè),這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。