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COLO320DM細胞公司相關(guān)產(chǎn)品:糖轉(zhuǎn)移酶8結(jié)構(gòu)域1抗體MDM2/FITC 熒光素標(biāo)記雙微體2癌因抗體IgG環(huán)指蛋白27抗體Phospho-MDM2 (Ser166) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化雙微體2癌因抗體IgG
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產(chǎn)品名稱:結(jié)直腸腺癌細胞;COLO320DM
英文簡稱:COLO320DM細胞
貨號:LZ-X968331
規(guī)格:T25
生長特性:半貼壁生長
凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
雞血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/KDR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2,4-二氟苯黃傘(可訂購)用途: 木聚糖酶應(yīng)用于食品飼料工業(yè)
雞血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2,4-二氟苯畢赤酵母拉丁屬名: Streptomyces fradiae
雞免疫球蛋白G Fc片段(Fcγ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3,5-二氟弗氏鏈霉菌拉丁屬名: Arthrobacter tecti
雞胸腺依賴性抗原(TD-Ag)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3,5-二氟天花板節(jié)桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
雞絨毛膜促性腺激素α肽(CGα)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2-硝-4-(三氟氧)苯亞黑管孔菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
雞角膜蛋白(KERA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2-硝-4-(三氟氧)苯貝倫格葡萄座腔菌梨生?;屠倜? Saccharomyces cerevisiae
雞凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2--4-氟苯釀酒酵母拉丁屬名: Monilinia fructicola
雞β甘露糖苷酶(β Manase)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2--4-氟苯美澳型核果褐腐病菌拉丁屬名: Streptomyces piomogenes
雞胸腺質(zhì)淋巴生成素(TSLP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(R)-(+)-4-羥-2-吡咯烷產(chǎn)皮歐(票)霉素鏈霉菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
雞腺苷環(huán)化酶4(ADCY4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2,4,6-三氟苯酚奧氏蜜環(huán)菌拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae Hansen
雞α1性糖蛋白(α1-AGP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒仲丁鋁釀酒酵母拉丁屬名: Idiomarina fontislapidosi
雞蛋白酪氨磷酶受體K(PTPRK)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒仲丁鋁石泉海源菌拉丁屬名: Pseudomonas simiae
雞神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(NRG-1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒仲丁鋁猴假單胞菌拉丁屬名: Halobacillus salinus
雞孤腓肽(OFQ/N)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2-乙酰苯并噻吩鹽漬喜鹽芽孢桿菌拉丁屬名: Flexibacter tractuosus
雞αL艾杜糖酶(IDUα)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2-乙酰苯并噻吩聚團屈撓桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
雞α2巨球蛋白(α2-M)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒紅鋁溶液菊池鏈格孢拉丁屬名: Pseudomonas frederiksbergensis
COLO320DM細胞雞睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-CSP/FITC 熒光素標(biāo)記環(huán)子孢子蛋白(約氏瘧原蟲)抗體IgG
雞活化蛋白C(APC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-CT/FITC 熒光素標(biāo)記降鈣素抗體IgG
雞優(yōu)球蛋白(EL)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-CT-1/CTF1/FITC 熒光素標(biāo)記心肌營養(yǎng)素1抗體IgG
雞α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-CT-R/FITC 熒光素標(biāo)記降鈣素受體抗體IgG
雞晶狀體蛋白αB (CRYαB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CSMD1/FITC 熒光素標(biāo)記抑癌因CSMD1抗體IgG
雞鞘脂激活蛋白原(PSAP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CTBP1/FITC 熒光素標(biāo)記C端結(jié)合蛋白1抗體IgG
雞白介素5(IL-5)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CT DNA /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗小牛胸腺DNA 抗體IgG
雞E選擇素(SELE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-CT DNA /Gold 膠體金標(biāo)記兔抗小牛胸腺DNA 抗體IgG(10nm/15nm)
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細菌或真菌污染,會嚴(yán)重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。