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COLO320HSR細(xì)胞公司相關(guān)產(chǎn)品:腺苷酸環(huán)化酶Gα蛋白/Gαs/olf抗體TPSB2/Tryptase Beta2/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠肥大類胰蛋白酶β2IgG周期蛋白G相關(guān)激酶抗體MCT1/FITC 熒光素標(biāo)記單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1抗體IgG
產(chǎn)品分類
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英文簡稱:COLO320HSR細(xì)胞
貨號:LZ-X968330
規(guī)格:T25
生長特性:半貼壁生長
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價,產(chǎn)品貨期短,價格優(yōu),售后齊全。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會嚴(yán)重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
雞成纖維生長因子23(FGF23)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2,5-二嘧啶釀酒酵母拉丁屬名: Agromyces indicus
雞抑肽酶(AP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2,5-二嘧啶印度農(nóng)霉菌拉丁屬名: Aspergillus tubingensis
雞纖溶酶-抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2,5-二嘧啶塔賓曲霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
雞成纖維生長因子受體底物3(FRS3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒三乙氫化鋰*松乳菇拉丁屬名: Phomopsis vaccinii Shear,
雞多配體聚糖1(SDC1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒三乙氫化鋰烏飯樹擬莖點(diǎn)霉用途: 與金合歡、黑荊相思樹共生固氮
雞白分化抗原CD42 (CD42)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒三乙氫化鋰豇豆慢生根瘤菌拉丁屬名: Enterobacter sakazakii
雞L選擇素(SELL)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2-苯乙異硫代酯阪崎腸桿菌拉丁屬名: Aspergillus cremeus
雞粘蛋白5B(MUC5B)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2-苯乙異硫代酯淡拉丁屬名: Aspergillus niger
雞脂蛋白a(LP-a)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1,2--d4黑曲霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
雞凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95/TNFRSF6)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 (+)-兒茶素 水合物裂孔平伏菌拉丁屬名: Pseudomonas cichorii
雞抑瘤素M(OSM)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(+)-兒茶素 水合物菊苣假單胞菌拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
雞血漿抗凝蛋白S(PS)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 (+)-兒茶素 水合物釀酒酵母拉丁屬名: Bacillus niacini
雞蘇氨酰tRNA合成酶(TARS)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 5-煙煙芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
雞轉(zhuǎn)錄激活因子-3(ATF-3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 5-煙枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
雞Bκ 輕肽因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(Nfkbie)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3,5-二氟苯釀酒酵母用途: 產(chǎn)果膠酶
雞補(bǔ)體因子8g(C8g)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3,5-二氟苯華根霉用途: 試驗(yàn)栽培
COLO320HSR細(xì)胞雞核糖體蛋白L10(RPL10)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CRMP2/Dpysl2(collapsin response mediator protein-2)/FITC 熒光素標(biāo)記抗二氫嘧啶酶樣2抗體IgG
雞Preptin 蛋白(Preptin)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Phospho-CRMP-2 (Thr514) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化二氫嘧啶酶樣2抗體IgG
雞B淋巴瘤因子10(Bcl-10)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CRP/Biotin 生物素化C-反應(yīng)蛋白抗體IgG
雞骨成型蛋白2 (BMP-2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-CRP/FITC 熒光素標(biāo)記C-反應(yīng)蛋白抗體IgG
雞松弛素/胰島素樣肽受體1(RXFP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CRP/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體IgG
雞Persephin蛋白(PSPN)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CRTAM/FITC 熒光素標(biāo)記CRTAM抗體IgG
雞間隙連接蛋白40(CX40)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-C-SKI/FITC 熒光素標(biāo)記抗C-SKI抗體IgG
雞N-乙酰β-D-氨葡萄糖苷酶(NAGase)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CSIG/FITC 熒光素標(biāo)記衰老抑制因抗體IgG