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BHK-21細(xì)胞公司相關(guān)產(chǎn)品:腦膠質(zhì)瘤發(fā)病相關(guān)蛋白2抗體MCM2/FITC 熒光素標(biāo)記微小染色體維持缺陷蛋白2抗體IgG神經(jīng)節(jié)苷脂誘導(dǎo)分化相關(guān)蛋白1抗體MCM3/FITC 熒光素標(biāo)記微小染色體維持缺陷蛋白3抗體IgG
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱:倉鼠腎成纖維細(xì)胞;BHK-21
英文簡稱:BHK-21細(xì)胞
貨號:LZ-X968323
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁生長
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案,必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
雞成纖維生長因子受體1(FGFR1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 二烯新戊二酯膠質(zhì)芽孢桿菌*拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
雞唾液淀粉酶α1(AMY1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 二烯新戊二酯釀酒酵母拉丁屬名: Phaffia rhodozyma M.W.Mill. Yoney.&Soneda
雞黑素瘤抑制性活性蛋白1(MIA1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2-羥-3-三氟吡啶紅法夫酵母*拉丁屬名: Candida blackwellae
雞分泌型免疫球蛋白A(sIgA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2-羥-3-三氟吡啶布萊克威爾假絲酵母拉丁屬名: rhuriopathiae
雞鈣視網(wǎng)膜蛋白(CR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒7-羥-3,4-二氫-2(1H)-喹啉豬丹絲菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
雞血小板因子4變種1(PF4V1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒7-羥-3,4-二氫-2(1H)-喹啉枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Streptococcus equinus
雞天門冬氨氨轉(zhuǎn)移酶(AST)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 7-羥-3,4-二氫-2(1H)-喹啉馬腸鏈球菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
雞凝血因子XIII A1多肽(F13A1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1-氨環(huán)丁烷羧木蹄層孔菌拉丁屬名: Bacillus thuringiensis
雞促有絲分裂因子(MF/MPF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1-氨環(huán)丁烷羧蘇云金芽孢桿菌拉丁屬名: Pseudomonas frederiksbergensis
雞絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 氮氧自由哌啶弗雷德里克斯堡假單胞菌拉丁屬名: Enterobacter cloacae
雞核孔蛋白37kda(NUP37)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒氮氧自由哌啶陰溝腸桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
雞乳脂球表皮生長因子8 (MFG-E8)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 氮氧自由哌啶枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Dyadobacter hamtensis
雞游離睪(F-TESTO)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 硫代苯酰漢塔成對桿菌拉丁屬名: Streptomyces netropsis
雞微精蛋白β(MSMβ)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒硫代苯酰紡錘狀鏈霉菌拉丁屬名: Bipolaris oryzae
雞三肽肽酶I(TPP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒硫代苯酰稻平臍蠕孢拉丁屬名: Saccharomyces bayanus
雞骨成型蛋白3(BMP-3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 4-羥-3-吡啶貝酵母拉丁屬名: Burkholderia sp.
BHK-21細(xì)胞雞神經(jīng)粘附分子(NCAM/CD56)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Glycodelin A/PP14/FITC 熒光素標(biāo)記胎盤蛋白14抗體IgG
雞半乳凝集素14(GAL14)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-Clusterin- Alpha/ Beta /FITC 熒光素標(biāo)記凝聚素α/β抗體IgG
雞谷轉(zhuǎn)氨酶(ALT)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-C-Myc/HRP (MYC/MTLC) 辣根過氧化物酶標(biāo)記致癌因C-Myc抗體IgG
雞膠原酶I(Collagenase I)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-C-Mer/MERTK /FITC 熒光素標(biāo)記c-mer原癌因酪氨酸激酶抗體IgG
雞不對稱二甲精氨酸(ADMA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-C-Met/HGFR /FITC 熒光素標(biāo)記肝生長因子受體(原癌因蛋白)抗體IgG
雞巨噬炎性蛋白3α(MIP-3α)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-C-Met/HGFR/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記肝生長因子受體(原癌因蛋白)抗體IgG
雞空泡素相關(guān)蛋白A(VacA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-SMMHC/MYH11/FITC 熒光素標(biāo)記平滑肌肌球蛋白重鏈抗體IgG
雞泛素激活酶樣蛋白(UBE1L)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-SM-MHC/FITC 熒光素標(biāo)記心肌肌凝蛋白抗體IgG
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
如果有細(xì)菌或真菌污染,會嚴(yán)重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導(dǎo)致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細(xì)胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。