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轉(zhuǎn)基因大豆MON品系核酸試劑盒廠家上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:己酮(標(biāo)準(zhǔn)品)溴異喹啉正十九烷(標(biāo)準(zhǔn)品)溴-氟甲酸正十五烷(標(biāo)準(zhǔn)品)鄰氨基三氟甲氧基咖啡酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)D-色氨酸檸檬酸無水Fmoc-Pbf-精氨酸檸檬酸無水(標(biāo)準(zhǔn)品)(R)-環(huán)氧烷
產(chǎn)品分類
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注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 轉(zhuǎn)基因大豆MON品系核酸試劑盒廠家 |
規(guī)格 | 48T |
貨號 | LZP8166 |
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
亞硫酸氫鈉穿心蓮內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)1,二甲氧基
5-羥色鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)溴-1-茚酮
月見草油(標(biāo)準(zhǔn)品)十二烷基硫酸鈉
龍血素A(標(biāo)準(zhǔn)品)羥基-2-硝基吡啶
木栓酮(標(biāo)準(zhǔn)品)2,6-二氟吡啶
表木栓(標(biāo)準(zhǔn)品)甲酰甲酸甲酯
老龍皮酸;網(wǎng)脊衣酸 A(標(biāo)準(zhǔn)品)三溴新戊
焦性沒食子酸(標(biāo)準(zhǔn)品)2-氟-6-酚
萘(標(biāo)準(zhǔn)品)2--吡啶
環(huán)己酮(標(biāo)準(zhǔn)品)溴異喹啉
正十九烷(標(biāo)準(zhǔn)品)溴-氟甲酸
正十五烷(標(biāo)準(zhǔn)品)鄰氨基三氟甲氧基
咖啡酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)D-色氨酸
檸檬酸無水Fmoc-Pbf-精氨酸
檸檬酸無水(標(biāo)準(zhǔn)品)(R)-環(huán)氧烷
硫酸(標(biāo)準(zhǔn)品)2,8-喹啉二
檳榔(標(biāo)準(zhǔn)品)2,二氟甲
β,β-二甲基酰阿卡寧(標(biāo)準(zhǔn)品)三基膦化釕
腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體FAM3B/PANDER /FITC 熒光素標(biāo)記胰腺衍生因子IgG100 ul
肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白1FANCD2/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、FANCD2IgG100 ul
β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白2(X11β)FANCD2(phospho Ser222) /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗、大、FANCD2IgG100 ul
酰輔酶A結(jié)合蛋白FANCF/FITC 熒光素標(biāo)記范可尼貧血相關(guān)蛋白FIgG1 Kit
酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16FAS/FITC 熒光素標(biāo)記FAS蛋白IgG100 ul
白血病相關(guān)蛋白AHI1FASN/FITC 熒光素標(biāo)記抗脂肪酸合成酶IgG100 ul
活化誘導(dǎo)胞嘧啶核苷脫氨酶FasL/FITC 熒光素標(biāo)記FasL蛋白IgG20 ul
三酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白9FAST kinase/FITC 熒光素標(biāo)記抗Fas活化的絲/蘇氨酸激酶IgG100 ul
ADP核糖基化因子3FBN1 /FITC 熒光素標(biāo)記原纖維蛋白1IgG100 ul
轉(zhuǎn)基因大豆MON品系核酸試劑盒廠家A型產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)Isomeranzin中文名:異橙皮內(nèi)酯別名:分子式:C15H16O4
胞嘧啶脫氨酶抗體dakenetin中文名:別名:Prangeferol; (-)-dakenetin分子式:C14H14O4
膽堿脫氫酶抗體Calalide E中文名:別名:分子式:C22H28O6
腫瘤標(biāo)志物CYFRA21-1抗體Bergaptol中文名:別名:分子式:C11H6O4
C2GNT3蛋白抗體Marmin中文名:馬爾敏別名:分子式:C19H24O5