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當(dāng)前位置:首頁  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  熒光-PCR法  -  48T牛BGH基因核酸試劑盒廠家

牛BGH基因核酸試劑盒廠家

產(chǎn)品簡介

牛BGH基因核酸試劑盒廠家
上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
沙必利(標(biāo)準(zhǔn)品)2--氨基-甲基吡啶

奧美拉唑鈉一水合物(標(biāo)準(zhǔn)品)N-氟代雙磺酰

鹽酸地匹福林(標(biāo)準(zhǔn)品)氟化銫

甲基麥冬黃酮A(標(biāo)準(zhǔn)品)抗壞血酸鈉

更新時(shí)間:2021-03-13
訪問次數(shù):759
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組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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 產(chǎn)品名稱

 牛BGH基因核酸試劑盒廠家

 規(guī)格

 48T

 貨號(hào)

 LZP8150

實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
鹽酸索他洛爾(標(biāo)準(zhǔn)品)二甲

拉西地平(標(biāo)準(zhǔn)品)溴-氟甲

拉西地平溴-氟

尼麥角林(標(biāo)準(zhǔn)品)基二酸二酯

鹽酸賽洛唑啉(標(biāo)準(zhǔn)品)吲哚丁酸

鹽酸賽洛唑啉DL-

酸二氫(標(biāo)準(zhǔn)品)三氧化鉻

長春(標(biāo)準(zhǔn)品)哌-2-甲酸

鹽酸咪達(dá)普利(標(biāo)準(zhǔn)品)二基磺酰

酸哌喹(標(biāo)準(zhǔn)品)2-氨基異煙酸

西沙必利(標(biāo)準(zhǔn)品)2--氨基-甲基吡啶

奧美拉唑鈉一水合物(標(biāo)準(zhǔn)品)N-氟代雙磺酰

鹽酸地匹福林(標(biāo)準(zhǔn)品)氟化銫

甲基麥冬黃酮A(標(biāo)準(zhǔn)品)抗壞血酸鈉

噴昔洛韋(標(biāo)準(zhǔn)品)氟氫化銨

貝那普利拉/那普利拉(標(biāo)準(zhǔn)品)反式-2-己酸

醋芬酸(標(biāo)準(zhǔn)品)氨茴酸甲酯

TG1012091-萘

ADP核糖基化因子樣蛋白4Egr-1/FITC  熒光素標(biāo)記早期反應(yīng)基因-1/應(yīng)急反應(yīng)生長基因1IgG100 ul

肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3eIF2 alpha/FITC  熒光素標(biāo)記真核啟動(dòng)因子2αIgG20 ul

肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型2eIF4E/FITC  熒光素標(biāo)記真核翻譯起始因子4EIgG1Kit

肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型4phospho-eIF4E(pSer209)/FITC  熒光素標(biāo)記酸化eIF-4E(Ser209)IgG100 ul

芳香基硫酸酯酶家族蛋白1HBA1/Gold  金標(biāo)記抗血紅蛋白α1IgG100 ul

腫瘤抑制相關(guān)蛋白PHEMXElastin/FITC  熒光素標(biāo)記抗彈性蛋白IgG100 ul

精神分裂癥與犰狳重復(fù)基因ELAVL1/HuR/FITC  熒光素標(biāo)記ELAVL1IgG100 ug

脫氫酶1型Elastin/Gold  金標(biāo)記抗彈性蛋白IgG100 ul

酸化酰輔酶A羧化酶ELK1/FITC  熒光素標(biāo)記細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1IgG100 ul
BGH基因核酸試劑盒廠家卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白75抗體p-Hydroxyphenethyl vanillate中文名:香草酸對(duì)羥基苯乙酯別名:分子式:C16H16O5

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白65抗體Cypellocarpin C中文名:桉葉苷別名:Camaldulenside分子式:C26H32O11

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白157抗體Grifolin momethyl ether中文名:奇果菌素單甲醚別名:分子式:C23H34O2

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白90B抗體Eucamalduside A中文名:別名:分子式:C26H32O11

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白104抗體Tetrahydrocannabivarin中文名:別名:Δ9-Tetrahydrocannabivarin; THCV分子式:C19H26O2

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