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肉毒桿菌E型(CB-E)核酸試劑盒說明書

產(chǎn)品簡介

肉毒桿菌E型(CB-E)核酸試劑盒說明書
上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
麝香酮(標準品)酰對氨基

升麻-O-β-D-吡喃木糖苷(標準品)硅粉

升麻素(標準品)環(huán)十二酮

升麻素苷(標準品)硝酸鎂

升麻酮-O-α-L-拉伯糖苷(標準品)維生素

更新時間:2021-03-13
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注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱

 肉毒桿菌E型(CB-E)核酸試劑盒說明書

 規(guī)格

 48T

 貨號

 LZP8103

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
(標準品)溴喹啉

山梔苷甲酯(標準品)2-辛基十二

商陸皂苷甲(標準品)2,環(huán)戊并吡啶

芍藥內(nèi)酯苷(標準品)甲基-硝基吡唑

蛇床子素(標準品)2-脫氧-D-核糖

蛇床子素(三氟甲氧基)甲

麝香酮(標準品)酰對氨基

升麻-O-β-D-吡喃木糖苷(標準品)硅粉

升麻素(標準品)環(huán)十二酮

升麻素苷(標準品)硝酸鎂

升麻酮-O-α-L-拉伯糖苷(標準品)維生素 B1

圣草次苷(標準品)焦酸硫素

圣草酚(標準品)維生素 C

石斛(標準品)新銅試劑

石榴皮鞣素(標準品)1-吡咯烷基丁

石杉甲(標準品)硝基

矢車菊素-O-葡萄糖苷(標準品)

紅花甙; 紅花黃色素酚

重組膜粘連蛋白5CIB1/FITC  熒光素標記鈣-整合素結(jié)合蛋白1IgG20 ul

銜接蛋白α-AdaptinCIDE-B/FITC  熒光素標記促進凋亡基因IgG100 ul

凋亡蛋白活性因子-1(C端)CIDEB/FITC  熒光素標記CIDEBIgG100 ul

凋亡蛋白活性因子-1(N端)C-jun/AP-1 /FITC  熒光素標記原癌基因蛋白/活化蛋白1IgG20 ul

三酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員2phospho-c-Jun (Ser73) /FITC  熒光素標記兔抗、大、原癌基因c-JunIgG100 ul

載脂蛋白ECK2/FITC  熒光素標記酪氨酸激酶2IgG100 ul

淀粉樣肽前體蛋白CK3/FITC  熒光素標記細胞角蛋白3IgG100 ul

水通道蛋白-2CK4/FITC  熒光素標記細胞角蛋白4IgG100 ul

血管緊張素原CK5/FITC  熒光素標記細胞角蛋白5IgG100 ul
肉毒桿菌E型(CB-E)核酸試劑盒說明書乙醇胺激酶β抗體Glabralide B中文名:別名:分子式:C21H26O3

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體Glabralide C中文名:別名:分子式:C29H40O4

有絲分裂著絲粒蛋白F抗體Muricarpone B中文名:別名:分子式:C19H22O5

細胞周期通道和神經(jīng)細胞分化蛋白1抗體Eulophiol中文名:別名:9,10-Dihydro-2,7-dimethoxyphenanthrene-1,5-diol分子式:C16H16O4

凝集蛋白家族10抗體(肝)3-(3-Hydroxybutyl)phel中文名:別名:分子式:C10H14O2

 

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