組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
氨芬酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)HER4/ErbB4 (111B2) Rabbit mAb2-氟-6-甲氧基

地塞米松環(huán)氧水解物HER4/ErbB4 (111B2) Rabbit mAbN-基馬來(lái)酰亞

2,6-二叔丁基對(duì)甲酚,丁基羥, 抗氧劑 BHT Clathrin Heavy Chain (D3C6) XP® Rabbit mAb硝酸釓

甲基潑尼松Clathrin Heavy Chain (D3C6) XP® Rabbit mAb甲基酸頻哪酯

甲基潑尼松(標(biāo)準(zhǔn)品)TNFRSF17/BCMA Antibody對(duì)叔丁基酮

阿普斯特;CC10004RalA (D6G8) Rabbit mAbS-基丁氨酸

L-(-)-葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)RIP3 (D4G2A) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-5-氟甲

7-酮基去氫表雄酮SMC1 Antibody2-氟-甲氧基

硝酸銣Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)鄰三氟甲氧基甲

CHIR-99021 (CT99021.HCl)SQSTM1/p62-like Receptor Antibody Sampler Kit鄰氨基

-3,5-二甲酚,對(duì)間二甲酚DCBLD2 AntibodyFmoc-2-氨基異丁酸

駱駝蓬;駱駝蓬靈;哈梅靈(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-SMC1 (Ser957) (5D11G5) Mouse mAb2-基吲哚

阿卡地新(AICAR)Phospho-NF-κB p105 (Ser933) (18E6) Rabbit mAb吉西他濱

蒲公英萜；蒲公英賽(標(biāo)準(zhǔn)品)Stat5a (4H1) Mouse mAb并噻吩

琥珀酸普卡必利Phospho-NF-κB p105 (Ser933) (178F3) Rabbit mAb (IHC Specific)5-硝基

鹽酸納洛酮Phospho-NF-κB2 p100 (Ser866/870) Antibody3,4,5-*氧基

硝酸布康唑Phospho-NF-κB2 p100 (Ser866/870) Antibody[1,1'-雙(二基膦)二茂鐵]二化鈀二絡(luò)合物

NVP-BKM120Phospho-NF-κB2 p100 (Ser866/870) Antibody2-氟甲

鴨抗凝血素(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒ATR/ACTR(phospho Ser428) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、ATRIgG20 ul

鴨極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒ATF2/FITC  熒光素標(biāo)記活化復(fù)制因子2IgG100 ul

鴨環(huán)酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒phospho-ATF2(Thr69/71) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗、大、、猴酸化活化復(fù)制因子2(phospho ATF 2)IgG100 ul

鴨環(huán)酸鳥(niǎo)苷(cGMP)ELISA試劑盒ATF3/FITC  熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子3IgG100 ul

鴨白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒ATF4/FITC  熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子4IgG100 ul

鴨白介素6(IL-6)ELISA試劑盒ATF6/FITC  熒光素標(biāo)記活化轉(zhuǎn)錄因子6IgG100 ul

鴨白介素4(IL-4)ELISA試劑盒ATG1/ULK1/FITC  熒光素標(biāo)記自噬相關(guān)蛋白1IgG20 ul

鴨白介素2(IL-2)ELISA試劑盒ATG7/FITC  熒光素標(biāo)記自噬相關(guān)蛋白7IgG100 ul

鴨白介素1(IL-1)ELISA試劑盒thrombin II /FITC  熒光素標(biāo)記凝血酶ⅡIgG100 ul
馬傳染性貧血（EIAV）核酸試劑盒規(guī)格甲狀腺激素受體共激活蛋白抗體8-Prenyldaidzein中文名：8-異戊烯基大豆苷元?jiǎng)e名：分子式：C20H18O4

堿性核蛋白1/鋅指蛋白basonuclin抗體Barpisoflavone A中文名：別名：2'-Hydroxyisoprunetin分子式：C16H12O6

癌膜蛋白11抗體（前梯度同源蛋白2）Erythrinin G中文名：別名：分子式：C20H18O6

酪氨酸蛋白激酶6/腫瘤激酶抗體Isolicoflavol中文名：異甘草黃酮醇別名：分子式：C20H18O6

骨堿性磷酸酶抗體Demethylvestitol中文名：別名：分子式：C15H14O4