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注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
頭孢噻肟鈉,噻孢霉素,頭孢霉素,先鋒霉素IhnRNP K (R332) Antibody環(huán)己酮羧酸

頭孢噻肟鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)AMPA Receptor 3 (GluA 3) (D47E3) Rabbit mAb5--2-嘧啶

VX11eAMPA Receptor 3 (GluA 3) (D47E3) Rabbit mAb3,二氟肼鹽酸鹽,98%

阿格列汀;阿洛利停KEAP1 (P586) Antibody-2-

莪術(shù)(標(biāo)準(zhǔn)品)PKCβ (D3E7O) Rabbit mAb甲酰

BYL719BMP4 (6B7) Mouse mAb5-甲基-2-硝基三氟甲

BYL719TLE1/2/3/4 AntibodyL-(+)-阿拉伯糖

A66,p110α抑制劑Mad-1 Antibody甲磺酰基肼鹽酸鹽

SC-514;IKK-2抑制劑PRDX2 Antibody3,5-二甲氧基溴芐

庚酮Akt (pan) (11E7) Rabbit mAb葉酸

γ-環(huán)糊精 MYST1 (D5T3R) Rabbit mAb1-萘甲酰

甲基倍他環(huán)糊精,2,6-二甲基-β-環(huán)糊精Mono-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D9J1D) Rabbit mAb (PE Conjuga)木糖

埃博霉素B；帕土匹龍Chronophin/PDXP (C85E3) Rabbit mAb2,4,6-三酚

BMS-345541Chronophin/PDXP (C85E3) Rabbit mAb5-溴-2-羥甲基吡啶

IKK-16,選擇性IKK抑制劑DKK1 Antibody糠酸

曲格列汀琥珀酸鹽 cdc25C (5H9) Rabbit mAb3,5-二溴-氨基三氟甲氧基

2-[2-(2-t-Boc-氨基氧基)氧基]cdc25C (5H9) Rabbit mAb鄰氨基三氟甲

2,8-二甲基-2,3,4,4a,5,9b-六氫-1H-吡啶并[4,b]吲哚Granzyme B (D6E9W) Rabbit mAb2-叔丁基酚

魚免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒Annexin II/FITC  熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白-2IgG20 ul

魚卵泡刺激素(FSH)ELISA試劑盒Annexin III /FITC  熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白 ⅢIgG100 ul

魚卵黃高蛋白(PV)ELISA試劑盒Annexin IV /FITC  熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白 ⅣIgG100 ul

魚酸酮酸羧激酶,線粒體(PCK2)ELISA試劑盒Annexin V/FITC  熒光素標(biāo)記重組膜粘連蛋白-5()IgG100 ul

魚酸酮酸羧激酶,細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)[GTP](PCK1)ELISA試劑盒Annexin VI/FITC  熒光素標(biāo)記膜粘連蛋白 VIIgG20 ul

魚酸化酰輔酶A羧化酶(pACCase)ELISA試劑盒Anopheles sphensi proin 1/FITC  熒光素標(biāo)記按蚊IgG100 ul

魚酸果糖激酶(PFK)ELISA試劑盒ANP/FITC  熒光素標(biāo)記抗心鈉肽（心鈉素）IgG20 ul

魚類*狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒Anthrax/FITC  熒光素標(biāo)記IgG100 ul

魚類甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒Anthrax/FITC  熒光素標(biāo)記（采用活疫苗制備）IgG20 ul
牛細(xì)小病毒（BPV）核酸試劑盒說(shuō)明書纖維調(diào)節(jié)蛋白抗體3-Allylrhodanine中文名：3-烯丙基羅丹寧別名：分子式：C6H7S2

富含亮氨酸跨膜纖連蛋白1抗體Nandrolone laurate中文名：月桂酸諾龍別名：分子式：C30H48O3

富含亮氨酸跨膜纖連蛋白2抗體Androst-5-ene-3β,17β-diol 3,17-diacetate中文名：雄甾-5-烯-3β,17β-二醇 3,17-二乙酸酯別名：分子式：C23H34O4

富含亮氨酸跨膜纖連蛋白3抗體Androstalone heptaate中文名：雄諾龍庚酸酯別名：分子式：C26H42O3

FAM65B蛋白抗體11α-Hydroxyandrost-4-ene-3,17-dione中文名：11α-羥基-雄甾-4-烯-3,17-二酮?jiǎng)e名：分子式：C19H26O3