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胸膜肺炎放線桿菌PCR檢測試劑盒廠家上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)和計數(shù)(《中華人民共和國藥典》2010年版)。卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱 | 胸膜肺炎放線桿菌PCR檢測試劑盒廠家 |
英文名稱 | Actinobacillus pleuropneumoniaePCR |
貨號 | LZP6334 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人NADPH氧化酶1(/MOX1/)elisa試劑盒Anti-AHR Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 通道蛋白
綿羊彈性蛋白酶2,中性粒細(xì)胞(ELA2)elisa試劑盒Anti-AHR Antibody研究領(lǐng)域 免疫學(xué)
雞過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA elisa試劑盒Anti-AHSA1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
大鼠活化蛋白C(APC)elisa試劑盒Anti-AHR Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 生長因子和激素 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶
大鼠骨粘連蛋白(ON)elisa試劑盒Anti-AIF1 Antibody研究領(lǐng)域 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 表觀遺傳學(xué)
大鼠雌三醇(E3)elisa試劑盒Anti-AHSG Antibody研究領(lǐng)域 心血管 神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白
GBC-SD(人膽囊癌細(xì)胞)現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-AHSG Antibody研究領(lǐng)域 心血管 神經(jīng)生物學(xué) 通道蛋白
HL-60(人早幼粒急性白血病細(xì)胞)說明書Anti-AHSG Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞周期蛋白 細(xì)胞分化
Lncap clone FGC(人前列腺癌細(xì)胞)現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-AICDA Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞周期蛋白 細(xì)胞分化 細(xì)胞骨架 細(xì)胞外基質(zhì)
豬β干擾素(IFN-β/IFNB)elisa試劑盒Anti-AIFM1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 鋅指蛋白 表觀遺傳學(xué)
小鼠鐵蛋白(FE)elisa試劑盒Anti-AIFM1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 表觀遺傳學(xué)
小鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)elisa試劑盒Anti-AIFM1 Antibody(原貨號PB0388)研究領(lǐng)域
小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)elisa試劑盒Anti-AIMP2 Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 通道蛋白 轉(zhuǎn)運蛋白
小鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)elisa試劑盒Anti-AIM2 Antibody(原貨號PB0721)研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 通道蛋白 細(xì)胞膜受體
小鼠芳香酶elisa試劑盒Anti-AIP Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 通道蛋白 細(xì)胞膜受體
尿素瓊脂(PH7.2)250g生化培養(yǎng)基,細(xì)菌脲酶檢測
NTMMedium
TBX 培養(yǎng)基 TBX Agar 1000ml 快速、準(zhǔn)確檢測大腸桿菌大腸桿菌培養(yǎng)24小時,顯蘭色
氨基酸脫羧酶試驗對照培養(yǎng)基250g/瓶細(xì)菌的氨基酸試驗對照incubationmedia氨基酸脫羧酶試驗對照培養(yǎng)基250g/瓶細(xì)菌的氨基酸試驗對照
Mannitol-Egg-Yolk-PolymyxinAgarBase
D-E中和肉湯 E Neutralizing Broth 250克 經(jīng)防腐劑或消毒劑處理的樣品增菌培養(yǎng)
D-E中性瓊脂 E Neutralizing Agar 250克 衛(wèi)生環(huán)境中微生物的分離培養(yǎng), 消毒效果測定
M肉湯 M-Broth 250克 牛奶和乳制品中乳酸菌檢測和增菌培養(yǎng)
BGS瓊脂 BGS Agar 250克 沙門氏菌分離培養(yǎng)
胸膜肺炎放線桿菌PCR檢測試劑盒廠家兔DC細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
兔NK細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
兔T淋巴細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
兔膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
兔膀胱平滑肌細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
兔膀胱上皮細(xì)胞5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。