Product Center
HCT-8/V細胞公司相關(guān)產(chǎn)品:血型糖蛋白δ抗體MEK1/ MAPKK 1/FITC 熒光素標記MEK1/ MAPKK 1抗體IgG糖皮質(zhì)激素誘導亮氨酸拉鏈蛋白抗體phospho-MEK1 (Thr286) /FITC 熒光素標記磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體IgG
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
RELATED ARTICLES產(chǎn)品名稱:結(jié)腸癌長春新堿耐藥株
英文簡稱:HCT-8/V細胞
貨號:LZ-X968335
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁生長
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價,產(chǎn)品貨期短,價格優(yōu),售后齊全。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個;
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
如果細胞收集過程中使用了胰酶,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
綿羊Apelin 13(AP13)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 雙聯(lián)(2--2,4-戊二)酯弗氏檸檬桿菌拉丁屬名: anatipestifer
綿羊雙上腺皮質(zhì)激素(DCX)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒特布他林半硫鹽鴨疫里氏桿菌拉丁屬名: Aspergillus ustus
綿羊高分子量角蛋白(CK-HMW)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 四丁化膦焦曲霉拉丁屬名: Vibrio mytili
綿羊腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒四丁化膦貽貝弧菌拉丁屬名: Bacillus thuringiensis
綿羊心肌肌鈣蛋白I(cTn-I/TNNI3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒1,7-菲羅啉蘇云金芽孢桿菌拉丁屬名: Chaetomium spirochaete
綿羊Ⅰ型膠原α2(COL1α2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 1,7-菲羅啉旋毛殼拉丁屬名: Phoma sp.
綿羊脂氧素A4(LXA4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 位十二內(nèi)酯莖點霉屬注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
綿羊轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3-羥己乙酯鮑姆木層孔菌拉丁屬名: Sphingomonas sanxanigenens
綿羊皮膚T淋巴相關(guān)抗原(CLA/CTAGE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 3-羥己乙酯胞外多聚物鞘氨單胞菌拉丁屬名: Bacillus licheniformis
綿羊Preptin 蛋白(Preptin)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2--4--5-硝吡啶地衣芽孢桿菌拉丁屬名: Shigella flexneri
綿羊腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2--4--5-硝吡啶福氏志賀氏菌拉丁屬名: Ustilaginoidea oryzae
綿羊脂肪結(jié)合蛋白1(FABP1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2--4--5-硝吡啶稻綠核菌拉丁屬名: Botryosphaeria dothidea
綿羊胸腺肽β4(TMSβ4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2--4-硝吡啶葡萄座腔菌拉丁屬名: Chaetomium murorum
綿羊GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2--4-硝吡啶突孢毛殼用途: 教學科研
綿羊白介素12 p40(IL-12 p40)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2--4-硝吡啶產(chǎn)黃青霉拉丁屬名: coli
綿羊中腦星型膠質(zhì)來源神經(jīng)營養(yǎng)因子(MANF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2--5--3-硝吡啶大腸埃希菌拉丁屬名: Candida guilliermondii
HCT-8/V細胞雞受體TNFRSF結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2(RIPK2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CXCL13/BLC-1/FITC 熒光素標記B-淋巴趨化因子抗體IgG
雞半乳凝集素2(GAL2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CXCL14/FITC 熒光素標記CXC趨化因子14抗體IgG
雞c-jun酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CXCL15/Lungkine/FITC 熒光素標記趨化因子CXCL15體IgG
雞絲裂原激活蛋白激酶激酶6(MAP2K6/MKK6)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CXCL16/FITC 熒光素標記CXC趨化因子16抗體IgG
雞Ⅲ型前膠原羧端原肽(PⅢCP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CXC-R1 /FITC 熒光素標記表面趨化因子受體1抗體IgG
雞胰腺再生蛋白4(REG4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Anti-CXC-R2/FITC 熒光素標記表面趨化因子受體2抗體IgG
雞β內(nèi)啡肽(β-EP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-CXCR3/CD183/FITC 熒光素標記表面趨化因子受體3抗體/G蛋白偶聯(lián)受體IgG
雞C4結(jié)合蛋白α(C4BPα)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Anti-CXCR3/CD183(rat,mo) /FITC 熒光素標記兔抗大、小鼠表面趨化因子受體3抗體IgG