Product Center
白酶(AT)ELISA試劑盒PKN2 蛋白激酶N220 ul抗血小板IgA(PA-IgA)ELISA試劑盒RKIP Raf激酶抑制蛋白100 ul抗血小板(IgM)ELISA試劑盒PKR 蛋白激酶R20 ul抗血小板(IgG)ELISA試劑盒Phospho-PKR (Thr446) 酸化蛋白激酶
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
RELATED ARTICLES注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 志賀氏菌PCR檢測試劑盒規(guī)格 |
規(guī)格 | 50T |
貨號 | LZP7888 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
雙(2,二基)草酸酯(>98.0%(T))Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) Antibody2-溴-3'-酮
草酸雙[2,4,5-三-6-(戊氧羰基)基]酯(>98.0%(HPLC))p53 (D2H9O) Rabbit mAb (Rodent Specific)硫代甲酰
8-氨基-1,3,6-萘三磺酸二鈉鹽水合物(>99.0%(HPLC)(T))Flotillin-1 Antibody2--甲基-5-硝基吡啶
8--1-萘磺酸(>95.0%(HPLC)(T))TTK Antibody2-氟-吡啶
ANS-NH4(8-基-1-萘磺酸銨)(>95.0%(HPLC)(T))TTK Antibody硫代卡巴肼
ANS-Na(=8-基-1-萘磺酸鈉)(>97.0%(N))Cleaved-PARP (Asp214) (E2T4K) Mouse mAb(S)-2,2-二甲基-1,二氧戊環(huán)-甲
ANS-Mg(=8-基-1-萘磺酸鎂)(>98.0%(HPLC)(T))CLK3 Antibody4,6-二甲基-2-巰基嘧啶
102(>97.0%(HPLC)(N))DNMT3A (D2H4B) Rabbit mAb2,二酮
314(>98.0%(HPLC)(N))VRK3 Antibody(R)-(+)-alpha,alpha-二基脯氨
化熒光素(>90.0%(HPLC))eIF3J Antibody月桂硫酸酯銨鹽
2',7'-二熒光素(>95.0%(HPLC))Human CD40 Ligand (hCD40L)甲氧基水楊酸
2,二氨基萘(>98.0%(GC)(T))Blk Antibody1-甲基-基
溴甲菲啶(>95.0%(HPLC)(N))eIF6 Antibody3,3,三氟-1-
7-(二甲基氨基)-甲基(>95.0%(GC)(T))Ero1-Lα Antibody人參皂苷 Rg1
7-(二甲基氨基)-三氟甲基(>97.0%(GC)(T))Ero1-Lα Antibody1,5-萘二
2,二基馬來酸酐(>95.0%(GC))VCAM-1 (D2T4N) Rabbit mAb (Mouse Specific)山梨酸
7-(二基氨基)-羧酸(>98.0%(GC)(T))EGF Receptor (V279) Antibody2--5-甲基嘧啶
[[(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)(3,5-二甲基-2H-吡咯-2-亞基)甲基]](二氟烷)(>98.0%(GC))ROS1 (69D6) Mouse mAb2,5-二嘧啶
顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒phospho-Akt(Thr308) 酸化蛋白激酶B100 ul
抗中性粒細(xì)胞核周(pANCA)ELISA試劑盒phospho-Akt (Thr450) 酸化蛋白激酶B500 ul
抗中性粒/中心體(ACA)ELISA試劑盒Phospho-HDAC4(Ser246)/HDAC5(Ser259)/HDAC7(Ser155) 酸化組蛋白去?;?、5、7100 ul
抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)ELISA試劑盒Phospho-HDAC4(Ser632)/HDAC5(Ser498)/HDAC7(Ser486) 酸化組蛋白去?;?、5、7100 ul
抗胰蛋白酶(AT)ELISA試劑盒PKN2 蛋白激酶N220 ul
抗血小板IgA(PA-IgA)ELISA試劑盒RKIP Raf激酶抑制蛋白100 ul
抗血小板(IgM)ELISA試劑盒PKR 蛋白激酶R20 ul
抗血小板(IgG)ELISA試劑盒Phospho-PKR (Thr446) 酸化蛋白激酶R100 ul
抗心脂IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒Phospho-PKR (Thr451) 酸化蛋白激酶R100 ul
志賀氏菌PCR檢測試劑盒規(guī)格輔酶Q10B抗體cis-Methylisoeugel中文名:順式甲基異丁香酚別名:Liquid分子式:C11H14O2
細(xì)胞因子受體樣因子1抗體p-Coumaric acid ethyl ester中文名:對香豆酸乙酯別名:Ethyl p-coumarate分子式:C11H12O3
半胱氨酸亞磺酸脫羧酶抗體erythro-Guaiacylglycerol中文名:別名:分子式:C10H14O5
神經(jīng)網(wǎng)蛋白CopineVI抗體3,4-Diacetoxycinnamamide中文名:3,4-二乙酰氧基肉桂酰胺別名:分子式:C13H135
豬瘟病毒包膜糖蛋白E2抗體Tatariid A中文名:別名:分子式:C12H16O5
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。