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啶1-氧基自由基(>97.0%(GC)(T))α-E-Canin AntibodyBOC-胍(2-酰氨基)-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基自由基(>96.0%(HPLC))Profilin-1 Antibody3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酸酯雞5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒PNK1/PNKP 多聚合苷酸激酶3酸
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION相關(guān)文章
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1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
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產(chǎn)品名稱 | 一步法RT-PCR試劑盒 |
規(guī)格 | 50T |
貨號 | LZP7884 |
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
吉拉德試劑 P(>95.0%(T))MCM4 Antibody2,2-二氟-2-溴酰
2-肼基吡啶(>98.0%(GC)(T))Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb2-氨基-氟吡啶
2-肼鹽酸鹽(>98.0%(T))Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb2-溴-5-甲酸
基-1,2,三唑啉-3,5-二酮(含氮量:23.50-24.30 %)Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb1-甲基胍鹽酸鹽
[3,5-二甲基-(硝基芐氧基)基]-氧代丁酸琥珀酰亞酯(>96.0%(HPLC))Phospho-Gab1 (Tyr627) Antibody基-1,磺酸內(nèi)酯
異酸對甲磺酰酯(>95.0%(T))Gab1 Antibody硝地平
N-叔丁基-α-基硝酮(>98.0%(HPLC)(T))Gab1 Antibody2-氟-5-甲酰基
N-叔丁基-α-(吡啶基-1-氧)硝酮(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-Gab1 (Tyr627) (C32H2) Rabbit mAb氟-
5,5-二甲基-1-吡咯啉 N-氧化物(>97.0%(GC)(T))Phospho-Gab1 (Tyr627) (C32H2) Rabbit mAb5-芐硫基四氮唑
5-(二氧基酰)-5-甲基-1-吡咯啉 N-氧化物(>98.0%(N))Autophagy Vesicle Elongation (Atg12 Conjugation) Antibody Sampler Kit2-羥基-硝基-甲基吡啶
亞(>98.0%(GC))SPHK2 (D2V3G) Rabbit mAb2-氨基-甲基-5-硝基吡啶
2,4,6-三叔丁基亞(>98.0%(GC))Phospho-Gab1 (Tyr307) Antibody2-溴基酮
3,3,5,5-四甲基-1-吡咯啉 N-氧化物(>98.0%(GC))Phospho-Gab1 (Tyr307) Antibody鹽酸羥
氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧自由基(>97.0%(GC))SKAR Antibody[-(三氟甲基)基]-哌啶
酰氨基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>98.0%(GC))TFEB (D4L2P) Rabbit mAb3,4,5-三溴
羧基-2,2,5,5-四甲基吡咯烷-1-氧基自由基(>98.0%(HPLC)(T))α-E-Canin Antibody3,5-二溴-2-羥基吡
羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基自由基(>97.0%(GC)(T))α-E-Canin AntibodyBOC-胍
(2-酰氨基)-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基自由基(>96.0%(HPLC))Profilin-1 Antibody3,5-二甲基-1H-吡咯-2-甲酸酯
雞5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒PNK1/PNKP 多聚合苷酸激酶3酸化酶100 ul
雞Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒Phospho-PNK1 (Ser114/Thr118) 酸化多聚合苷酸激酶3酸化酶20 ul
雞Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)ELISA試劑盒Podoplanin/gp36 平足蛋白100 ul
雞17-酮類固(17-KS)ELISA試劑盒Pokemon 蒙蛋白100 ul
雞17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)ELISA試劑盒Polycystin 1 多囊腎蛋白1100 ul
雞13,14二氫15-酮F2α(PGFM)ELISA試劑盒Polycystin 2 多囊腎蛋白2100 ul
ELISA試劑盒PP-1B 蛋白酸酯酶-1B100 ul
可溶性白介素-2 受體(sIL-2R)ELISA試劑盒PP2A alpha 蛋白質(zhì)酸酶-2A100 ul
可溶性Toll樣受體6(sTLR6)ELISA試劑盒PP2A alpha 蛋白質(zhì)酸酶-2A20 ul
一步法RT-PCR試劑盒人白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒英文名稱:Human Leukotriene C4,LT-C4 ELISA Kit進(jìn)口/原裝
人白三烯D4(LTD4)ELISA試劑盒英文名稱:Human leukotriene D4,LT-D4 ELISA Kit*
人白三烯E4(LTE4)ELISA試劑盒 英文名稱:Human leukotriene E4,LT-E4 ELISA Kit *
人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒英文名稱:Human Candida Albicans,C.albicans ELISA Kit*
人白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒 英文名稱:Human leukocyte exastase,HLE ELISA Kit*
人白細(xì)胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA試劑盒英文名稱:Human leukocyte common antigen,LCA/CD45 ELISA Kit*小鼠中性粒細(xì)胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒 組裝/原裝
小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 組裝/原裝
小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒 組裝/原裝
小鼠脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒 組裝/原裝