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蟲啉(標準品)Bim (C34C5) Rabbit mAbN-Boc-哌啶甲酸酯殺蟲環(huán)標準溶液(10μg/ml,u=7%,基體:甲)Histone H2B (53H3) Mouse mAb二丁三環(huán)唑標準溶液(100μg/ml,u=2%)Histone H4 (L64C1) Mouse mAb5-并噻吩三環(huán)唑標準溶液(10μg/ml,u=2%)Histone H4 (L64C1) Mou
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1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
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產品名稱 | 鸚鵡熱衣原體PCR檢測試劑盒規(guī)格 |
規(guī)格 | 50T |
貨號 | LZP7864 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
1,2,三標準溶液(0.103mg/ml ,基體:異辛烷)Jak1 (E3A6M) Rabbit mAb丁炔二酸
(標準品)Cyclin H Antibody己酸
特丁津(標準品)Cyclin H Antibody雙(三基膦)化鎳
三特丁基膦(1.0 M in toluene)DAPK3/ZIPK AntibodyBoc-氨甲基哌啶
吡螨(標準品)EpCAM (VU1D9) Mouse mAb醋酸銅
萘酰(標準品)Phospho-PSD93 (Tyr340) Antibody酸鎂
去草凈(分析標準品,99%)Bim (C34C5) Rabbit mAb四氟酸鋰
噻蟲啉(標準品)Bim (C34C5) Rabbit mAbN-Boc-哌啶甲酸酯
殺蟲環(huán)標準溶液(10μg/ml,u=7%,基體:甲)Histone H2B (53H3) Mouse mAb二丁
三環(huán)唑標準溶液(100μg/ml,u=2%)Histone H4 (L64C1) Mouse mAb5-并噻吩
三環(huán)唑標準溶液(10μg/ml,u=2%)Histone H4 (L64C1) Mouse mAb溴代十二烷
氟樂靈標準溶液(100μg/ml,u=3%)Helios (D8W4X) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)2-脫氧-2,2-二氟-3,5-二甲酰基-D-呋喃核糖
草達津(標準品)Cyclin D3 (DCS22) Mouse mAbD-氨酸甲酯鹽酸鹽
(分析標準品,99%)Cyclin D3 (DCS22) Mouse mAb四二二甲
阿克泰(分析標準品,98%)TP/ECGF1 Antibody十六
三唑酮(分析標準品,99.8%)Akt1 (C73H10) Rabbit mAbL-環(huán)己基甘氨酸
三唑酮標準溶液(100μg/ml,溶劑:石油)Akt1 (C73H10) Rabbit mAb3,4,5-三氟酸
甲基托布津(分析標準品)p58IPK (C56E7) Rabbit mAb(R)-(-)-甘油縮酮
綿羊ELISA試劑盒phospho-P53 (Ser6) 酸化腫瘤抑制基因P53100 ul
綿羊甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒phospho-P53 (Ser9) 酸化腫瘤抑制基因P5320 ul
綿羊基質金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP9/Gelatinase B)ELISA試劑盒phospho-P53 (Thr18) 酸化腫瘤抑制基因P53100 ul
綿羊基質金屬蛋白酶3(MMP3)ELISA試劑盒phospho-P53 (Thr81) 酸化腫瘤抑制基因P53100 ul
綿羊基質金屬蛋白酶1(MMP1)ELISA試劑盒phospho-p53BP1(Ser25/29) 酸化p53結合蛋白120 ul
綿羊饑餓激素(GHRL)ELISA試劑盒WIG-1 p53活化基因608100 ul
綿羊黃體生成素(LH)ELISA試劑盒PAG608 p53活化基因608100 ul
綿羊環(huán)酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒PAG608 p53活化基因608100 ul
綿羊環(huán)酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒p58ipk p58ipk100 ul
鸚鵡熱衣原體PCR檢測試劑盒規(guī)格小鼠胚胎成纖維細胞,3T3-L1細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠胚胎成纖維細胞,BALB/3T3 clone A31細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠胚胎成纖維細胞,MEF細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠胚胎干細胞,E14細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠胚胎干細胞,SOX1-GFP細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶
小鼠胚胎瘤細胞,ATDC5細胞1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶