注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
四甲基硫酸氫銨(離子色譜級,≥99.0%(T))PAK3 Antibody羥基磺酸鈉

三(LC-MS淋洗劑,≥99.5%(GC))PAK3 Antibody代叔丁烷

四基溴化銨(離子對色譜級)PTMScan® Glutaryl-Lysine [Glut-K] Kit6,6'-二甲基-2,2'-聯(lián)吡啶

四丁基化銨(離子對色譜級)PRAS40 Antibody二醋酸酯

三辛(離子對試劑)Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) Antibody5-甲基異噁唑-酰氨

甲酸鈉(for HPLC,≥99.0%(NT))PRK2 Antibody4,5-二氨基-6-巰基嘧啶

1-己烷磺酸鈉(離子對色譜級,>98.0%(T))HP1β Antibody2-溴酰

高酸鈉，無水(for HPLC,99.0%)Pan-Calcineurin A Antibody氟磺?；柞?/span>

四甲基溴化銨(離子對色譜級,≥99.0%(AT))PAK2 (C17A10) Rabbit mAb三氟

三溴(光譜級,>99.0%(GC))PAK2 (C17A10) Rabbit mAb3,二

草酸鈉容量分析用溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(0.05M)HP1α Antibody對甲氧基甲酸酯

氫氧化鈉容量分析用標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.0997mol/L)eIF4G (C65H5) Rabbit mAb三羥甲基氨烷馬來酸酯

剛果紅(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97.0%(HPLC))HP1γ Antibody(2S,5S)-2,5-己二

正癸酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))Jagged1 (28H8) Rabbit mAb并[B]噻吩-酸

異丁酸(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.5%(GC))Jagged1 (28H8) Rabbit mAb2-(1H-吡唑-1-基)酸

甲基反亞油酸甲酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品)CD161/KLRB1 (HP-3G10) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjuga)N-BOC-L-1,2,3,四氫異喹啉-羧酸

肉豆蔻酸甲酯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))JMJD1B/JHDM2B Antibody2-氨基-5-溴甲酰

三聚(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(HPLC))GST Antibody5-溴-2-氟三氟甲

8異(8-iso-PG)ELISA試劑盒NEDD4L/NEDD4-2  泛素連接酶NEDD4-2100 ul

8-異構(gòu)F2α(8-epi-PGF2α)ELISA試劑盒Phospho-NEDD4L (Ser342)  酸化泛素連接酶NEDD4-2100 ul

8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒NCoR2  核受體輔助抑制因子2100 ul

8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)ELISA試劑盒NEP/MME  金屬肽鏈內(nèi)切酶100 ul

6酮F1a(6-keto-PGF1a)ELISA試劑盒NDRG1/Cap43  分化相關(guān)基因NDRG1100 ul

6酮(6-K-PG)ELISA試劑盒Phospho-NDRG1 (Ser330)  酸化分化相關(guān)基因NDRG1100 ul

6-羥多巴(6-OHDA)ELISA試劑盒Phospho-NDRG1 (Thr346)  酸化分化相關(guān)基因NDRG120 ul

60S核糖體蛋白L36a-樣(RPL36AL)ELISA試劑盒NDRG2  抑癌基因NDRG2100 ul

60S核糖體蛋白L17(RPL17)ELISA試劑盒NDRG3  抑癌基因NDRG3100 ul
蟹特定基因序列PCR檢測試劑盒價(jià)格人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA試劑盒英文名稱：Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MAdCAM-1 ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人黏著斑激酶(FAK)ELISA試劑盒英文名稱：Human focal adhesion kinase,FAK ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶(OCT)ELISA試劑盒英文名稱：Human ornithine carbamoyl transferase,OCT ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人鳥氨酸脫羧酶(ODC)ELISA試劑盒英文名稱：Human Ornithine decarboxylase,ODC ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人鳥苷酸交換因子(GEF)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Guanine Exchange Factor,GEF ELISA Kit*

人鳥苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)ELISA試劑盒英文名稱：human guanylate nucleotide binding protein 4,Gbp4 ELISA Kit*小鼠維生素B12(VB12)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠維生素A(VA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠病毒（MVM）ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠網(wǎng)膜素(omein)ELISA試劑盒      組裝/原裝         
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。