組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

?

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
Lead chlorideβ-D-葡萄糖五乙酸酯 98%2,6-二羥基喹啉 90%

Manganese chlorideD-半乳糖烯 95%乙鈉 96%

Silver chlorideD-葡糖酸-γ-內(nèi)酯酮化合物 98%乙鈉 20% w/w乙溶液

Strontium chloride hexahydrateD-葡萄烯糖 96%甲鈉 97%

Rubidium chlorideβ-D-半乳糖五乙酸酯 98%甲鈉溶液 30 wt%甲溶液

Ruthenium(III) chloride5,6-O-異叉基-L-抗壞血酸 97%檸檬酸鉍銨 99%

Ruodium (Ⅲ) Chloride Hydrate乳糖酸 97%硫酸鉍 AR,99%

Cerous chloride1,2-O-異亞基-D-呋喃葡萄糖 98%硫化亞銅 85-90%，工業(yè)級

Lanthanum chloride heptahydrateα-甲基-D-甘露糖苷 99%氧化亞銅 AR,95.0%

Neodymium(III) chlorideL-核糖 98%硫化銅 AR,99.0%

Hematin三-O-乙酰-D-半乳糖烯 97%亞碲酸 99.5%

Ethylene glycol三-O-乙?；?D-葡萄烯糖 98%亞碲酸鈉 97%

PVAL-蘇糖酸鈣 98% AR,98%

PVB乙酰溴-α-D-葡萄糖 包含 1% CaCO3 穩(wěn)定劑, 98%0.99

1,3-Propanediol2-丁酮 for HPLC, ≥99.7% 分析標準品，≥99.7%

1,3-Butanediol鄰二氯苯 for HPLC,99%2-乙酰基-3-甲基吡  98%

1,1-二氯乙烷(分析標準品,用于環(huán)境分析,≥99.7%(GC))Histone H2A (L88A6) Mouse mAbMAGEA12  黑色素瘤相關(guān)抗原12抗體

2,4-二硝苯標準溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)CD14 (61D3) Mouse mAb (APC Conjugate)MAGEA11  黑色素瘤相關(guān)抗原11抗體

2,4-二硝苯標準溶液(1.00mg/ml,基體：甲)Histone H3 (96C10) Mouse mAbMAGEA11  黑色素瘤相關(guān)抗原11抗體

2,4-二硝苯(分析標準品,用于環(huán)境分析)Histone H3 (96C10) Mouse mAbMAGEA10  黑色素瘤相關(guān)抗原10抗體

鄰苯二甲酸二異癸酯(標準品)PRC1 AntibodyMAGE-1  黑色素瘤相關(guān)抗原抗體

2，4-二胺(標準品)Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAbMAG-a/L-MAG  髓鞘相關(guān)糖蛋白-a抗體

2，2-二甲基丁烷(分析標準品,>99.5%(GC))Synaptophysin (D8F6H) XP® Rabbit mAbMAG-a/b  髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b抗體

2,3-二甲基丁烷(分析標準品,≥99.9%(GC))tch Isoform Antibody Sampler KitMAG1  肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白抗體

3,4-二氯甲苯(分析標準品,用于環(huán)境分析)Helios (D4Z6D) Rabbit mAbMAFbx/Fbx32  泛素蛋白連接酶抗體

2,6-二氯芐基氯(標準品)Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Mafa  v-maf 肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A抗體
鼻病毒PCR檢測試劑盒價格22號染色體開放閱讀框36抗體5-Acetyl-2-(1-hydroxy-1-methylethyl)benzofuran中文名：別名：分子式：C13H14O3

22號染色體開放閱讀框9抗體Myrciaphene A中文名：別名：分子式：C14H18O9

腫瘤高表達細胞周期相關(guān)蛋白抗體1-(3-(1-Hydroxy-3-methylbutyl)-4-methoxyphenyl)ethan-1-one中文名：別名：分子式：C14H20O3

9號染色體開放閱讀框117抗體3,5-Dihydroxy-1,7-bis(3,4-dihydroxyphenyl)heptane中文名：別名：分子式：C19H24O6

6號染色體開放閱讀框120抗體5-Acetyl-6-hydroxy-2-(1-hydroxy-1-methylethyl)benzofuran中文名：別名：分子式：C13H14O4