注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
Quinacrine dihydrochloride 對磷酸二鈉 六合物 細(xì)胞培養(yǎng)級, ≥98%1H-咪唑-4-甲酸 98%

2-Amifluorene對磷酸二鈉 for enzyme immuassay,≥99.0%三氟磺酸酐 98%

2-Amipyrimid鈉 AR，98.0% 3-溴 98%

5-Nitrouracil磺胺二甲氧嘧啶 98%苯并-15-冠-5 98%

AntipyrineD-(+)-海藻糖 二合物  from Saccharomyces cerevisiae, ≥99%鄰苯二酚-O，O′-二乙酸 97%

Vaselineoil三(羥甲基)甲基甘氨酸 99%1-(3-氨基基)吡咯烷 97%

Vaselineoil三(羥甲基)甲基甘氨酸 99.5%2-苯氧基溴乙烷 98%

Arlacel A3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺 98%氯代異丁烷 98%

Benzil3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯 ≥99%(HPLC)氯代正烷 99%

Chrysene3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺 standard for GC, ≥99.0% (GC)氯代正烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.8% (GC)

DiphenylacetyleneTris乙磺酸 99%氯代仲丁烷 99%

Euparal三(羥甲基)氨烷鹽酸鹽 99%1-氯代正戊烷  Standard for GC, ≥99.5% (GC)

IndanN-乙基-N-（2-羥基-3-磺基）-3-胺鈉鹽 99%1-氯代正戊烷 99%

Indole3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽 98%環(huán)戊乙酸 98%

Oleyl alcohol2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸 98%1,4-二氯丁烷 98%

Phthalide三(羥甲基)氨烷 標(biāo)準(zhǔn)緩沖物質(zhì), ≥99.9% (titration)2-羥基-4-甲氧基苯甲 98%

金雀花堿,野靛堿A1/Bfl-1 (D1A1C) Rabbit mAbPPAR alpha  α型-過氧化酶活化增生受體抗體

金雀花堿,野靛堿（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (PE Conjugate)PPAPDC3  磷脂酸磷酸酶2結(jié)構(gòu)域3抗體

厄貝沙坦Catalase (D5N7V) Rabbit mAbPPAP2C  磷酸脂磷酸解酶2抗體

5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-胸苷-3'-O-丁二酸MORF4L1/MRG15 (D2Y4J) Rabbit mAbPPAP2A  磷酸脂磷酸解酶1抗體

楊苷IRF-1 (D5E4) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)PP2CA/PPM1A  蛋白磷酸酶2C亞型α抗體

楊苷(標(biāo)準(zhǔn)品)GIMAP5 AntibodyPP2Ac/PP4C  磷酸酯酶-2Ac抗體

厚樸酚Mo-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D9J1D) Rabbit mAbPP2A beta/PPP2CB  蛋白質(zhì)磷酸酶2B抗體 PP2A β PP2A-β

厚樸酚(標(biāo)準(zhǔn)品)Mo-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D9J1D) Rabbit mAbPP2A alpha/beta  蛋白質(zhì)磷酸酶-2A抗體

埃索美拉唑鎂(三)Di-Methyl Lysine Motif [dme-K] MultiMab™ Rabbit mAb mixPP1C gamma  蛋白磷酸酶γ1抗體

蘆丁/蕓香葉苷PathScan® Total PSA/KLK3 Sandwich ELISA KitPP-1B  蛋白磷酸酯酶-1B抗體
呼吸道合胞病毒PCR檢測試劑盒廠家人周期素依賴性激酶1(CDK-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人周期素依賴性激酶2(CDK-2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人周期素依賴性激酶4(CDK-4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人周期素依賴性激酶5(CDK5)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人周期素依賴性激酶7(CDK-7)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8°C25克

人軸突生長誘向因子1(Ntn1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100毫克

人軸突生長誘向因子4(Ntn4)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25毫升

人主要穹窿蛋白(MVP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃25毫升
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。