注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒8次說(shuō)明書(shū)Anti-Mad2L1研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡

包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝100 次說(shuō)明書(shū)Anti-MRP9/ABCC12研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 干細(xì)胞 細(xì)胞類(lèi)型標(biāo)志物 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物

包涵體微量純化試劑盒20 次說(shuō)明書(shū)Anti-MARK2蛋白分子量  predicted molecular weight: 48kDa

包涵體中量純化試劑盒5次多少錢(qián)Anti-MATK蛋白分子量  predicted molecular weight: 19/30/37kDa

親和層析柱1 mL哪里有賣(mài)Anti-MRP8/ABCC11研究領(lǐng)域  心血管 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞凋亡 生長(zhǎng)因子和激素

包涵體大量純化試劑盒2次品牌Anti-MGAT5產(chǎn)品類(lèi)型  一抗

動(dòng)物線粒體總蛋白提取劑盒50 次品牌Anti-MIIP蛋白分子量  predicted molecular weight: 4.5kDa

親和層析柱12 mL品牌Anti-MSX1蛋白分子量  predicted molecular weight: 36kDa

親和層析柱3 mL說(shuō)明書(shū)Anti-MARCH6研究領(lǐng)域  心血管 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子

親和層析柱50 mL說(shuō)明書(shū)Anti-MUM1/FLJ14868蛋白分子量  predicted molecular weight: 45kDa

蛋白折疊試劑盒100 次哪里有賣(mài)Anti-MAGEA10研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物

親和層析柱30 mL哪里有賣(mài)Anti-MAGEA11研究領(lǐng)域  腫瘤 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 干細(xì)胞 激酶和磷酸酶

動(dòng)植物總蛋白微量提取試劑盒50 次品牌Anti-Mammaglobin A蛋白分子量  predicted molecular weight: 37kDa

鈷柱介質(zhì)10mL哪里有賣(mài)Anti-Myosin-XVIIIb研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) G蛋白偶聯(lián)受體 淋巴細(xì)胞

磷酸化蛋白富集試劑盒10 次多少錢(qián)Anti-MEOX 2研究領(lǐng)域  發(fā)育生物學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 生長(zhǎng)因子和激素 細(xì)胞骨架

5-氮胞苷/阿扎胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)proCNP/NPPC (pro-natriuretic peptide)  促尿鈉排泄肽前體C抗原TIRAP  白細(xì)胞介素1受體銜接蛋白抗體

鹽酸氮卓斯汀NPY2R(Neuropeptide Y Receptor Type 2)  神經(jīng)肽Y受體2（多肽）TIP47/M6PRBP1  脂滴相關(guān)蛋白TIP47抗體

鹽酸氮卓斯?。?biāo)準(zhǔn)品）NPY1R (neuropeptide Y1 receptor)  神經(jīng)肽Y1受體抗原TIP30  TIP30蛋白抗體

阿奇霉素NQO1(NAD(P)H:quine oxidoreductase l)  醌氧化還原酶抗原TIMP-4  金屬蛋白酶組織抑制因子-4抗體

阿奇霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）NR1/NMDAR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1)  谷氨酸受體1（多肽）TIMP-3  金屬蛋白酶組織抑制因子-3抗體

氨曲南NR1/NMDAR1/GLUR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1)  谷氨酸受體1抗原TIMP-2  金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體

氨曲南（標(biāo)準(zhǔn)品）NR1/NMDAR1  谷氨酸受體1TIMP-1(NT)  金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（N端）

巴卡丁 IIINR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprtate receptor 2C)  谷氨酸受體2C（多肽）TIMP-1(CT)  金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（C端）

巴卡丁 III（標(biāo)準(zhǔn)品）N-ras  原癌基因抗原TIMM17A  線粒體內(nèi)膜轉(zhuǎn)位酶抗體

巴氯芬Nrf2 peptide  核因子2相關(guān)因子2抗原TIM4  T淋巴細(xì)胞膜蛋白4抗體
支原體通用PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格人白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT13.5×15cm/張

人白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：50張

人白介素2(IL-2)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT100張

人白介素23(IL-23)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

人白介素27(IL-27)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT500克

人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光5克

人白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10克

人白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：500克
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。