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腺伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書

產(chǎn)品簡介

腺伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書
上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
IL-2R檢測試劑盒
用于鑒別綠膿桿菌產(chǎn)生綠膿菌素試驗(yàn),滅菌前培養(yǎng)基需加入10mL/L甘油(029080)。(GB)綠膿菌素測定用培養(yǎng)基(PDP)

更新時間:2021-03-14
訪問次數(shù):687
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注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

 產(chǎn)品名稱

 腺伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書

 英文名稱

 Adenoassociated Virus(AAV)PCR

 貨號

 LZP6343

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人肌腱蛋白R(TN-R)elisa試劑盒Anti-APLN Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué)

人環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)elisa試劑盒Anti-APLP1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

人黑色素瘤活性抑制蛋白(MIA)elisa試劑盒Anti-APLP2 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)

人果糖胺(FRA)elisa試劑盒Anti-APOA1 Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞外基質(zhì)

人含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)elisa試劑盒Anti-APLP1 Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞類型標(biāo)志物

人分泌型卷曲相關(guān)蛋白2(SFRP2)elisa試劑盒Anti-APOA1 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

人肺炎衣原體抗原(Cpn)elisa試劑盒Anti-APOA1 Antibody(原貨號PB0887)研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué)

人肺耐藥蛋白(LRP)elisa試劑盒Anti-APOB Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞膜蛋白

人泛素結(jié)合酶E2D2(UBC4/5的同源物酵母)(UBE2D2)elisa試劑盒Anti-APOB Antibody(原貨號PB1096)研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子

人多巴胺D1受體(D1R)elisa試劑盒Anti-APOA1 Antibody(原貨號PB0888)研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞膜蛋白

人對氧磷酶-3(PON3)elisa試劑盒Anti-APOA1 Antibody(原貨號PB0963)研究領(lǐng)域 腫瘤 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞外基質(zhì)

人調(diào)寧蛋白-1(CNN1)elisa試劑盒Anti-APOBEC3A Antibody研究領(lǐng)域 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞粘附分子 細(xì)胞外基質(zhì)

人凋亡相關(guān)蛋白激酶(DAPK)elisa試劑盒Anti-APOBEC3G Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)

人電壓門控鉀通道(VGKC)elisa試劑盒Anti-APOE Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 發(fā)育生物學(xué) 細(xì)胞分化

人抵抗素(Resistin)elisa試劑盒Anti-APOD Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué)

CDC厭氧菌瓊脂250g厭氧菌的分離培養(yǎng)

M-腸道菌瓊脂 M-Enterococcus Agar 水中或其它物質(zhì)中腸球菌分離培養(yǎng)和計數(shù)(濾膜法或劃線法)

酸性肉湯 Acid Broth 250 酸性缺罐頭食品商業(yè)無菌檢驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))

酵母基礎(chǔ),無維生素250g/瓶通過維生素的利用對酵母菌進(jìn)行分類incubationmedia酵母基礎(chǔ),無維生素250g/瓶通過維生素的利用對酵母菌進(jìn)行分類

NAMedium

抗生素7號培養(yǎng)基  Antibiotic Agar NO.7  250克  頭孢噻圬鈉等的效價測定

抗生素8號培養(yǎng)基  Antibiotic Agar NO.8  250克  去甲萬古霉素的效價測定

標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基  SPCA  250克  細(xì)菌總數(shù)的計數(shù)

平板計數(shù)瓊脂  PCA  250克  食品細(xì)菌總數(shù)測定和平板計數(shù)
腺伴隨病毒PCR檢測試劑盒說明書磷酸化肌醇聚磷酸鹽磷酸酶樣蛋白1抗體Vibralactone B中文名:韌革菌素B別名:分子式:C12H16O4

胰島素受體抗體Stachybotramide中文名:別名:分子式:C25H355

胰島素受體α抗體Bakkelide III中文名:別名:Fukilidiol分子式:C15H22O4

整合素α4抗體3-Epichromolaenide中文名:別名:3-Epihiyodorilactone B分子式:C22H28O7

整合素β3抗體Mollisorin A中文名:別名:分子式:C20H26O5
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

 

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