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衣氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:ALDH檢測試劑盒用于分離和初步鑒別單增李斯特氏菌和其它李斯特菌李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱 | 衣氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Actinomyces israeliiPCR |
貨號 | LZP6339 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人肺炎衣原體抗體IgM(Cpn-IgM)elisa試劑盒Anti-ANGPT1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
人多功能蛋白聚糖(versican)elisa試劑盒Anti-ANGPT1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 細(xì)胞凋亡 激酶和磷酸酶
人多巴胺-β羥化酶(DBH)elisa試劑盒Anti-ANGPT1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 糖尿病 糖蛋白
人疊氮胸苷(AZT)elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 激酶和磷酸酶
人電子轉(zhuǎn)運(yùn)黃素蛋白-泛醌氧化還原酶/電子轉(zhuǎn)運(yùn)黃素蛋白脫氫酶elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領(lǐng)域 心血管 細(xì)胞生物 免疫學(xué)
人低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物 線粒體
人蛋白酶體(prosome,macropain)亞基,β型,2(PSMB2)elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 免疫學(xué) 染色質(zhì)和核信號
人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物
人存活素抗體/生存蛋白(Surv)elisa試劑盒Anti-ANGPTL3 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物
人層粘連蛋白-5(LN-5)elisa試劑盒Anti-ANGPTL1 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 生長因子和激素 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物
人不對稱二甲基精氨酸(ADMA)elisa試劑盒Anti-ANGPTL2 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 染色質(zhì)和核信號 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物 表觀遺傳學(xué)
人補(bǔ)體因子I(CFI)elisa試劑盒Anti-ANGPTL3 Antibody研究領(lǐng)域 腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞骨架 腫瘤細(xì)胞生物標(biāo)志物
人補(bǔ)體1q(C1q)elisa試劑盒Anti-ANGPTL8 Antibody研究領(lǐng)域 微生物學(xué) 細(xì)菌及
人胞質(zhì)動(dòng)力蛋白(CD)elisa試劑盒Anti-ANGPTL4 Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 糖蛋白
人伴侶蛋白10(CPN10)elisa試劑盒Anti-ANLN Antibody研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 G蛋白偶聯(lián)受體
布氏肉湯添加劑2ml*5每支加入225ml布氏肉湯中
NA培養(yǎng)基 NA Medium 菌落總數(shù)測定
抗生素檢定培養(yǎng)基4號 Antibiotic Agar No.4 250 兩性霉素B等的效價(jià)測定
Pfizer腸球菌選擇性瓊脂(PSE瓊脂)250g/瓶糞鏈球菌選擇性分離incubationmediaPfizer腸球菌選擇性瓊脂(PSE瓊脂)250g/瓶糞鏈球菌選擇性分離
ListeriaEnrichmentBrothBase
乳糖-明膠培養(yǎng)基 Lactose-Gelatin Medium 250克 產(chǎn)氣莢膜梭菌明膠液化試驗(yàn)
TSC瓊脂 TSC Agar 250克 產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計(jì)數(shù)
PY培養(yǎng)基 PY Medium 250克 產(chǎn)氣莢膜梭菌的培養(yǎng)
產(chǎn)芽孢肉湯 Sporulation Broth 250克 產(chǎn)氣莢膜梭菌的產(chǎn)芽孢培養(yǎng)
衣氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書即刻早期基因ARC抗體2"-O-Glucosylrutin中文名:別名:Quercetin 3-O-β-D-glucopyrasyl(1→2)[α-L-rhampyrasyl(1→6)]-β-D-glucopyraside分子式:C33H40O21
ADP核糖基化因子6抗體Procyanidin B2 3''-O-gallate中文名:原花青素B2-3''-O-沒食子酸酯別名:Epicatechin-(4β→8)-epicatechin 3''-O-gallate分子式:C37H30O16
芳香化酶抗體Procyanidin B5中文名:原花青素B5別名:Procyanidin B-5; Epicatechin-(4β→6)-epicatechin分子式:C30H26O12
Artemin抗體2'',3''-Dihydroochnaflavone中文名:別名:分子式:C30H20O10
alpha 1腎上腺素能受體A抗體Procyanidin C1中文名:原花青素C1別名:分子式:C45H38O18
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。