Bradford蛋白濃度測定試劑盒操作說明：

一．微孔酶標(biāo)儀法

1. *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，取 10μL，稀釋至 250μL ，使終濃度為 0.2mg/ml。待測蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用 0.9%NaCl 或PBS 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

2. 5×G250 染色液使用前請顛倒 3-5 次混勻，取 1ml 5×G250 染色液，加入 4ml 雙蒸水，混勻成 1×G250染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

3. 將標(biāo)準(zhǔn)品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分別加到 96 孔板中，加 PBS 稀釋液補(bǔ)足到 20 微升。

4. 將樣品作適當(dāng)稀釋（多做幾個梯度，如作 2 倍、4 倍、8 倍稀釋），加 20 微升到 96 孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線 1/2后。

5. 各孔加入 200 微升稀釋后的 1×G250 染色液，室溫放置 3-5 分鐘。

6. 用酶標(biāo)儀測定 A595，或 560-610nm 之間的其它波長的吸光度。

7. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中的蛋白濃度。

二．分光光度計法

如無酶標(biāo)儀，染色反應(yīng)可在離心管中進(jìn)行，反應(yīng)液混勻后加入比色皿中，使用分光光度計測定吸光值。步驟如下：

1. 取八支（或者更多）干凈的 10ml 離心管，標(biāo)記上號。

2. 取 100μLBSA 加入 PBS 2.4ml 稀釋至終濃度為 0.2mg/ml。

3. 5×G250 染色液使用前請顛倒 3-5 次混勻，取 10ml 5×G250 染色液，加入 40ml 雙蒸水，混勻成 1×G250 染色液，此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

4. 按下表加入試劑(以每孔 5ml 計，多余的用來清洗比色皿)。

5. 反應(yīng) 3 分鐘后測 OD 值。為了實驗的準(zhǔn)確性，可每間隔 2 分鐘加一管染色液，每間隔 2 分鐘測一管 OD 值。